Trước khi được bổ nhiệm giữ chức Thứ trưởng Bộ Tư pháp, ông Mai Lương Khôi đã trải qua các chức vụ như: Lãnh đạo Phòng Công chứng số 1 Thành phố Hồ Chí Minh, lãnh đạo Phòng Thi hành án dân sự Thành phố Hồ Chí Minh, Giám đốc Trung tâm Đấu giá Thành phố Hồ Chí Minh, Phó Giám đốc Sở Tư pháp Thành phố Hồ Chí Minh, Phó Tổng cục trưởng Tổng cục Thi hành án dân sự; Tổng cục trưởng Tổng cục Thi hành án dân sự, Bộ Tư pháp.